Prevalence of Ehrlichia canis and Hepatozoon canis in sheltered dogs in southern Aburrá Valley, Colombia

Background: Bacteria of the Anaplasmataceae family and canine hemoparasitic protozoans transmitted by ticks are common in Colombia due to circulation and biological adaptation of vector Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s.l.). Objective: To detect the circulation of Ehrlichia canis and Hepatozoon canis in sheltered dogs in three municipalities in southern Aburrá Valley, province of Antioquia, Colombia. Methods: Primers were used to amplify the 16S rRNA associated with the Anaplasmataceae family, dsb for Ehrlichia sp. and 18S rRNA for Hepatozoon sp. Results: Of the 357 samples of venous blood obtained, representing all the sheltered dogs in the study zone, Ehrlichia canis DNA was detected in 2.2% of individuals, showing identity of 100% with previous sequences from the GenBank. Hepatozoon canis showed 8.7% (31/357) prevalence of infection, with 100% identity to genotypes from Japan, Brazil, and Spain. Only one sequence of H. canis exhibited a phylogenic divergence concerning H. canis previously reported in Brazil and the Old World. Conclusions: This study confirms the circulation of E. canis and H. canis in asymptomatic shelter dogs in the south-central zone of the Aburrá Valley, province of Antioquia, Colombia. The present study is the first molecular detection of H. canis in the Province of Antioquia and the third report of canine hepatozoonosis from Colombia, highlighting the importance of considering this agent in veterinary clinic.

Antecedentes: Los agentes patógenos transmitidos por garrapatas, tales como las bacterias de la familia Anaplasmataceae y los protozoos hemoparasitarios caninos, son comunes en Colombia debido a la circulación y la adaptación biológica del vector Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s.l.). Objetivo: Detectar la circulación de Ehrlichia canis y Hepatozoon canis en perros protegidos en tres municipios del sur del Valle de Aburrá, departamento de Antioquia, Colombia. Métodos: Se usaron cebadores para amplificar el gen 16S rRNA asociado con la familia Anaplasmataceae y el gen dsb para Ehrlichia sp. y el 18S rRNA para Hepatozoon sp. Resultados: De las 357 muestras de sangre venosa obtenidas, que representan a todos los perros de albergues en la zona de estudio, 2,2% fueron positivas para Ehrlichia canis, con 100% de identidad con secuencias anteriores publicadas en todo el mundo. Hepatozoon canis mostró una prevalencia de infección del 8,7% (31/357), con una identidad del 100% con genotipos de Japón, Brasil y España. Solo una secuencia de H. canis exhibió divergencia filogénica en relación con H. canis previamente reportada en Brasil y el Viejo Mundo. Conclusiones: Este estudio confirma la circulación de E. canis y H. canis en perros asintomáticos de albergues en la zona centro-sur del Valle de Aburrá, departamento de Antioquia, Colombia. El presente estudio es la primera detección molecular en el Departamento de Antioquia y el tercer reporte de hepatozoonosis canina de Colombia destacando la importancia de considerar este agente en la clínica veterinaria.

Antecedentes: Agentes patogênicos transmitidos por carrapatos, como bactérias da família Anaplasmataceae e protozoários hemoparasitários caninos, são comuns na Colômbia devido à circulação e adaptação biológica do vetor Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s.l.). Objetivo: Detectar Ehrlichia canis e Hepatozoon canis em cães abrigados em três municípios do sul do vale de Aburrá, departamento de Antioquia, Colômbia. Métodos: Os primers foram utilizados para amplificar o rRNA 16S associado à família Anaplasmataceae, o dsb para Ehrlichia sp. e o rRNA 18S para Hepatozoon sp. Resultados: Das 357 amostras de sangue venoso obtidas, representando todos os cães abrigados na zona de estudo, 2,2% foram positivas para Ehrlichia canis, com 100% de identidade com sequências anteriores publicadas em todo o mundo. Hepatozoon canis mostrou uma prevalência de infecção de 8,7% (31/357), com 100% de identidade com genótipos do Japão, Brasil e Espanha. Apenas uma sequência de H. canis apresentou divergência filogênica em relação a H. canis previamente relatados no Brasil e no Velho Mundo. Conclusões: Este estudo confirma a circulação de E. canis e H. canis em cães de abrigo assintomáticos na zona centro-sul do vale de Aburrá, departamento de Antioquia, Colômbia. O presente estudo é a primeira detecção molecular no Departamento de Antioquia e o terceiro relato de hepatozoonose canina na Colômbia, destacando a importância de considerar este agente na clínica veterinária.

Ocorrência de Babesia sp, Ehrlichia canis e Hepatozoon canis em cães domiciliados, em dois municípios do estado do Espírito Santo - Brasil / Occurrence of Babesia sp, Ehrlichia canis and Hepatozoon canis in domiciled dogs in two municipalities of the state of Espírito Santo - Brazil / Ocurrencia de Babesia sp, Ehrlichia canis y Hepatozoon canis em perros domiciliados em dos municipios del estado de Espírito Santo - Brasil

As doenças transmitidas por carrapatos são afecções de grande importância na clínica médica de pequenos animais, devido à alta casuística e ampla distribuição vetorial no território brasileiro. Os principais agentes responsáveis pelas infecções em cães são Babesia sp., Ehrlichia canis e Hepatozoon canis. Os animais infectados são assintomáticos ou apresentam sinais clínicos inespecíficos, sendo necessário a utilização de testes diagnósticos para definição do agente etiológico, e diagnóstico seguro. O objetivo do presente estudo foi determinar a ocorrência desses micro-organismos em cães naturalmente infectados, domiciliados nos municípios de Vila Velha e Anchieta, Espírito Santo, utilizando diferentes testes de detecção: Reação em cadeia polimerase (PCR), sorologia para detecção de anticorpos anti Ehrlichia canis e pesquisa de hematozoários em esfregaço sanguíneo. Foram analisadas 65 amostras de sangue obtidas por venopunção de veia cefálica de cães. No teste de PCR, 4,62% dos animais foram positivos para Babesia vogeli e 1,54% para Ehrlichia canis sendo os resultados para Hepatozoon canis negativos. No teste sorológico para E. canis 90,77% dos animais foram positivos para a presença de anticorpos, e na pesquisa em lâminas de esfregaço sanguíneo 3,02% apresentavam outros hemoparasitas. Os resultados indicam a dispersão desses hemoparasitas na população canina da região de estudo, entretanto com baixa ocorrência. O teste de PCR demonstrou-se como o mais sensível no qual Babesia vogeli foi o agente mais observado.(AU)

Tick-borne diseases are diseases of great importance in the medical practice of small animals, due to the high casuistry and wide vectorial distribution in the Brazilian territory. The main agents responsible for infections in dogs are Babesia sp., Ehrlichia canis and Hepatozoon canis. Infected animals are asymptomatic or present nonspecific clinical signs, requiring the use of diagnostic tests to define the etiologic agent, and safe diagnosis. The objective of the present study was to determine the occurrence of these microorganisms in naturally infected dogs domiciled in the municipalities of Vila Velha and Anchieta, Espírito Santo, using different detection tests: polymerase chain reaction (PCR), serology to detect antibodies against Ehrlichia canis and research of hematozoa in blood smears. Sixty-five blood samples obtained by venipuncture of the cephalic vein of dogs were analyzed. In the PCR test, 4.62% of the animals were positive for Babesia vogeli and 1.54% for Ehrlichia canis, and the results for Hepatozoon canis were negative. In the serological test for E. canis, 90.77% of the animals were positive for the presence of antibodies, and in the research in blood smear slides, 3.02% presented other hemoparasites. The results indicate the dispersion of these hemoparasites in the canine population of the study region, however with low occurrence. The PCR test proved to be the most sensitive, in which Babesia vogeli was the most observed agent.(AU)

Las enfermedades transmitidas por garrapatas son enfermedades de gran importancia en la práctica médica de los pequeños animales, debido a la alta casuística y amplia distribución vectorial en el territorio brasileño. Los principales agentes responsables de las infecciones en los perros son Babesia sp., Ehrlichia canis y Hepatozoon canis. Los animales infectados son asintomáticos o presentan signos clínicos inespecíficos, siendo necesario el uso de pruebas diagnósticas para la definición del agente etiológico, y el diagnóstico seguro. El objetivo del presente estudio fue determinar la ocurrencia de estos microorganismos en perros infectados naturalmente, domiciliados en los municipios de Vila Velha y Anchieta, Espírito Santo, utilizando diferentes pruebas de detección: reacción en cadena de la polimerasa (PCR), serología para detectar anticuerpos anti Ehrlichia canis e investigación de hematozoos en frotis de sangre. Se analizaron sesenta y cinco muestras de sangre obtenidas por venopunción de la vena cefálica de los perros. En la prueba PCR, el 4,62% de los animales fueron positivos para Babesia vogeli y el 1,54% para Ehrlichia canis, y los resultados para Hepatozoon canis fueron negativos. En la prueba serológica para E. canis, el 90,77% de los animales fueron positivos a la presencia de anticuerpos, y en la investigación en láminas de frotis de sangre el 3,02% presentaron otros hemoparásitos. Los resultados indican la dispersión de estos hemoparásitos en la población canina de la región de estudio, aunque con una baja presencia. La prueba PCR resultó ser la más sensible, en la que Babesia vogeli fue el agente más observado.(AU)

Occurrence of tick-borne pathogens in dogs in a coastal region of the state of Ceará, northeastern Brazil / Ocorrência de patógenos transmitidos por carrapatos em cães em uma região litorânea do estado do Ceará, nordeste do Brasil

Abstract The aim of this study was to determine the occurrence of tick-borne pathogens (Ehrlichia canis, Babesia vogeli, Hepatozoon spp. and Rickettsia spp.) in dogs in Vila de Jericoacoara, coastal region of Ceará, Brazil. Blood samples were collected from 153 animals and analyzed using molecular and serological methods. Sixty animals were found to be infected or exposed to at least one of the pathogens studied. Babesia vogeli was the most prevalent pathogen (15%), followed by E. canis (13.7%) and Hepatozoon spp. (11.8%), which was identified as Hepatozoon canis through sequencing. Twenty dogs (13%) were seroreactive to Rickettsia spp. Rhipicephalus sanguineus sensu lato was observed on 11.8% of the animals. There were associations between age (< 3 years old) and positivity for B. vogeli, and between habitation (stray dogs) and positivity for H. canis. There were also associations between anemia and infection with H. canis, and between leukopenia and exposure to Rickettsia spp. No association was detected between clinical alterations and infection with or exposure to the pathogens studied. The results confirmed that pathogens of veterinary importance are circulating in northeastern Brazil and showed that dogs are exposed to Rickettsia species with zoonotic potential, thus indicating a need for vector control measures.

Resumo O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de patógenos transmitidos por carrapatos (Ehrlichia canis, Babesia vogeli, Hepatozoon spp. e Rickettsia spp.) em cães na Vila de Jericoacoara, região costeira do Ceará, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 153 animais e analisadas por métodos moleculares e sorológicos. Sessenta animais foram encontrados infectados ou expostos a pelo menos a um dos patógenos estudados. Babesia vogeli foi o patógeno mais prevalente (15%), seguido por E. canis (13,7%) e Hepatozoon spp. (11,8%), que foi identificado como Hepatozoon canis por sequenciamento. Vinte cães (13%) foram sororreativos à Rickettsia spp. Rhipicephalus sanguineus sensu lato foi observado em 11,8% dos animais. Houve associações entre idade (<3 anos) e positividade para B. vogeli, e entre habitação (cães de rua) e positividade para H. canis. Também houve associações entre anemia e infecção por H. canis, e entre leucopenia e exposição a Rickettsia spp. Não foi detectada associação entre alterações clínicas e infecção ou exposição aos patógenos estudados. Os resultados confirmaram que patógenos de importância veterinária estão circulando no nordeste do Brasil e mostraram que cães estão expostos a espécies de Rickettsia com potencial zoonótico, indicando a necessidade de medidas de controle do vetor.

Molecular detection of Babesia canis vogeli and Hepatozoon canis in dogs in the department of Magdalena (Colombia) / Detección molecular de Babesia canis vogeli y Hepatozoon canis en perros en el departamento del Magdalena (Colombia)

ABSTRACT The canine population in the cities of Ciénaga and Santa Marta has been estimated at 54,953 based on individual dogs with owners. Due to the role that dogs play in society, either as pets or as transmitters of zoonoses to humans, we conducted a study with 169 blood samples from dogs that visited two veterinary clinics in these locations between March and September of 2017. The objective of the study was to detect species of Babesia and Hepatozoon canis by amplifying the 18S gene using conventional polymerase chain reaction (PCRc). The presence of Babesia sp. and Hepatozoon canis was detected in 15 (8.87%) and 12 (7.10%) DNA samples, respectively. In addition, 7 (4.14%) cases of coinfection were recorded. The Babesia sp. sequences obtained corresponded to the B. canis vogeli subspecies. This both pathogens in the Colombian Caribbean region and cases of coinfection in Colombian dogs. Therefore, the national veterinary community is encouraged to consider the information presented here in their differential diagnoses associated with companion vector-borne diseases (CVBDs). This information will allow veterinary professionals to create control and prevention strategies to prevent the spread of these infections.

RESUMEN La población canina en las ciudades de Ciénaga y Santa Marta se ha estimado en 54.953 individuos con propietarios. Debido al rol que desempeñan los perros en la sociedad, ya sea como animales de compañía o como transmisores de zoonosis al humano, se realizó un estudio con 169 muestras sanguíneas de perros que visitaron dos clínicas veterinarias en estas localidades entre marzo y septiembre del año 2017. El objetivo del estudió consistió en detectar especies de Babesia y Hepatozoon canis amplificando el gen 18S mediante reacción en cadena de la polimerasa convencional (PCR-c). La presencia de Babesia sp. y Hepatozoon canis se detectó en 15 (8,87%) y 12 (7,10%) muestras de ADN, respectivamente. Además, se registraron 7 (4,14%) casos de coinfección. Las secuencias obtenidas de Babesia sp. correspondieron a la subespecie B. canis vogeli. Se presentan ambos patógenos para la región Caribe colombiana y casos de coinfección en perros de Colombia. Por lo tanto, se exhorta a la comunidad veterinaria nacional a considerar la información presentada en sus diagnósticos diferenciales asociados a las enfermedades transmitidas por vectores de compañía (CVBDs). Esta información permitirá a los profesionales veterinarios crear estrategias de control y prevención para mitigar la propagación de estas infecciones.

Molecular detection of vector borne pathogens in anemic and thrombocytopenic dogs in southern Brazil / Detecção molecular de patógenos transmitidos por vetores em cães anemicos e trombocitopenicos no Sul do Brasil

Abstract Arthropod-borne pathogens are medically important because of their ability to cause diseases in their hosts. The purpose of this study was to detect the occurrence of Ehrlichia spp., piroplasmids and Hepatozoon spp. in dogs with anemia and thrombocytopenia in southern Brazil. EDTA-whole blood was collected from 75 domestic dogs presenting anemia or/and thrombocytopenia from Guarapuava, state of Paraná, Brazil. DNA samples were subjected to conventional PCR assays for Ehrlichia spp. (dsb), piroplasmids (18S rRNA) and Hepatozoon spp. (18S rRNA), followed by sequencing and phylogenetic analyses. Among the 75 dogs, one (1.33%) was positive for Hepatozoon sp. and six (8%) were positive for piroplasmids in 18S rRNA cPCR assays. None of the dogs showed positive results in Ehrlichia spp.-cPCR targeting dsb gene. The phylogenetic analyses revealed that three piroplasm sequences were clustered with Rangellia vitalii, while one sequence was grouped with B. vogeli. The only sequence obtained from Hepatozoon spp.-PCR protocol was pooled with H. canis. Therefore, there is urgent need for differential molecular diagnosis of the two piroplasm species cited as etiological agents in clinical cases of canine hemoparasitic diseases, given the higher pathogenic potential of R. vitalii than of B. vogeli.

Resumo Agentes transmitidos por artrópodes têm grande importância na medicina veterinária devido à sua capacidade de causar doenças graves em seus hospedeiros. O presente estudo objetivou investigar a ocorrência de três patógenos transmitidos por vetores, Ehrlichia canis, Rangelia vitalii e Hepatozoon canis, em cães na região sul do Brasil. Foram coletadas amostras de sangue total de 75 cães domésticos que apresentavam anemia e/ou trombocitopenia, em Guarapuava, Paraná, Brasil. As amostras de DNA foram submetidas à técnica de PCR convencional para E. canis (dsb), piroplasmídeos (18S rRNA) e Hepatozoon spp. (18S rRNA), seguida de sequenciamento e análises filogenéticas. Das 75 amostras, uma (1,33%) foi positiva para Hepatozoon spp. e seis (8%) foram positivas para Babesia spp. Nenhuma amostra mostrou resultados positivos para Ehrlichia spp. utilizando a detecção pelo gene dsb. As análises filogenéticas revelaram que três sequências obtidas foram agrupadas no mesmo clado que R. vitalii , enquanto uma foi agrupada juntamente com B. vogeli. A única sequência obtida pelo protocolo de PCR para Hepatozoon spp. foi agrupada juntamente com H. canis. Assim, é justificada necessidade de diferenciação das espécies de piroplasmas, através do diagnóstico molecular, como agentes etiológicos nos casos clínicos de hemoparasitose canina, considerando o potencial patogênico de R. vitalii quando comparado à B. vogeli.

Detección molecular y análisis filogenético de Hepatozoon canis (Eucoccidiorida: Haemogregarinidae) en perros clínicamente sanos de Bahía Blanca (Buenos Aires)

Las enfermedades caninas causadas por protozoarios y transmitidas por garrapatas representan un importante problema en medicina veterinaria. El objetivo del estudio fue detectar molecularmente Hepatozoon spp., Babesia spp. y Theileria spp. en perros clínicamente sanos de distintas regiones de Argentina y analizar la diversidad genética de los hallazgos obtenidos. Se analizaron 163 muestras de ADN de sangre de perros (40 de Ciudad Autónoma de Buenos Aires; 33 de Bahía Blanca, Buenos Aires; 15 de Castelli, Chaco; 27 de Salsipuedes, Córdoba; 40 de Merlo, San Luis; y 8 de San Miguel, Corrientes). Mediante una PCR que amplifica un fragmento variable (460-540 pb) del gen ARNr 18S incluyendo la región V4 de los géneros Hepatozoon, Babesia y Theileria, el 12,1 % (4/33) de los perros de Bahía Blanca (Buenos Aires) resultaron positivos. Las secuencias obtenidas se identificaron como Hepatozoon canis y resultaron filogenéticamente similares a hallazgos en Sudamérica y en el resto del mundo. El estudio de H. canis en Argentina mediante técnicas moleculares de diagnóstico junto con el análisis filogenético resulta de suma importancia para conocer la situación de este patógeno en el país.

Tick-borne protozoan canine diseases represent a major problem in veterinary medicine. The aim of the study was to detect molecularly Hepatozoon spp., Babesia spp. and Theileria spp. in clinically healthy dogs from different regions of Argentina and to analyze the genetic diversity of the findings. DNAs extracted from 163 blood samples from dogs (40 from Buenos Aires city; 33 from Bahia Blanca, Buenos Aires; 15 from Castelli, Chaco; 27 from Salsipuedes, Córdoba; 40 from Merlo, San Luis; and 8 of San Miguel, Corrientes) were studied by PCR amplifying a variable fragment (460-540 bp) of the 18S rRNA gene including the V4 region of the genera Hepatozoon, Babesia and Theileria. Four dogs from Bahia Blanca (12.1%) were positive and the sequences obtained were identified as Hepatozoon canis and were phylogenetically similar to findings in South America and the rest of the world. The study of H. canis in Argentina with molecular methods together with phylogenetic analysis is important in order to know the situation of this pathogen in this country.

Aspectos anatomopatológicos em cães naturalmente infectados por Hepatozoon canis / Anatomopathological findings in dogs naturally infected by Hepatozoon canis

A hepatozoonose canina é causada principalmente pelos protozoários Hepatozoon canis e H. americanum, transmitida por ingestão de carrapatos parasitados. Os sinais clínicos podem ser inespecíficos ou de difícil reconhecimento, pois geralmente ocorre associada a outras doenças. No Brasil, o parasito, e a doença, já foram identificados em vários Estados, no entanto pouco se sabe sobre as alterações clínicas e anátomo-patológicas decorrentes da infecção. O presente trabalho relata cinco casos de infecções naturais por Hepatozoon canis em cães do Estado de Minas Gerais e descreve pela primeira vez no Brasil os achados de necropsias e histopatológicos relacionados à infecção. Merontes de Hepatozoon sp., submetidos a avaliação morfométrica, foram observados em cortes histológicos de fígado, baço, medula óssea e rim.(AU)

Canine hepatozoonosis is mainly caused by protozoa Hepatozoon canis and H. americanum that are transmitted by ingestion of infected ticks. Clinical signs may be unspecific or difficult to identify, because usually hepatozoonosis occurs associated with other disease. In Brazil, the parasite and the disease, have been identified in several states, however little is known about the clinical and anatomopathological lesions resulting from the infection. This paper reports five cases of natural infection by Hepatozoon canis in dogs from Minas Gerais State and describes for the first time in Brazil the necropsy and histopathological findings related to infection. Meronts of Hepatozoon sp., submitted to morphometric evaluation, were observed in histological sections of liver, spleen, bone marrow and kidney.(AU)

First Case of Canine Infection with Hepatozoon canis (Apicomplexa: Haemogregarinidae) in the Republic of Korea

This report describes a dog infected with Hepatozoon canis, the first canine infection in the Republic of Korea. A 2-year-old intact male Maltese dog presented with anorexia and depression. Physical examinations revealed mild dehydration and hyperthermia (39.8°C), and blood analysis showed pancytopenia. Diff-Quik staining of blood smear specimens showed the presence of ellipsoidal shaped structures (gamonts of H. canis) within a small number of neutrophils. Real-time PCR analysis using whole blood confirmed infection by H. canis. The clinical condition of the dog improved after symptomatic treatment and administration of doxycycline. Although a molecular epidemiologic survey in Korea showed H. canis infection of dogs, to our knowledge this is the first report of a dog infection in Korea molecularly shown to be H. canis.

Hepatozoon canis and Leishmania spp. coinfection in dogs diagnosed with visceral leishmaniasis / Coinfecção com Hepatozoon canis e Leishmania spp. em cães diagnosticados com leishmaniose visceral

Abstract This study describes the occurrence of dogs naturally co-infected with Hepatozoon canis and two Leishmania species: L. infantum or L. braziliensis. Four dogs serologically diagnosed with Visceral Leishmaniasis were euthanized. Liver and spleen samples were collected for histopathological analysis and DNA isolation. H. canis meronts were observed in tissues from all four dogs. H. canis infection was confirmed by PCR followed by sequencing of a fragment of 18S rRNA gene. Leishmania detection and typing was confirmed by ITS1' PCR-RFLP and parasite burden was calculated using ssrRNA quantitative qPCR. A DPP - Dual Path platform test was performed. One out (Dog #2) of four animals was asymptomatic. Dogs #1 and #4 were infected by L. infantum and were DPP test positive. Dogs #2 and #3 were infected by L. braziliensis and were DPP test negative. Furthermore, visceral dissemination was observed in Dogs #2 and #3, since L. braziliensis was detected in liver and spleen samples. The visceral dissemination of L. braziliensis associated with systemic signs suggested that this co-infection could influence the parasite burden and disease progression.

Resumo O presente estudo descreve a ocorrência de coinfecção com Hepatozoon canis e duas espécies de Leishmania (L. infantum ou L. braziliensis) em cães. Quatro cães sorologicamente diagnosticados com leishmaniose visceral foram eutanasiados. Amostras do baço e fígado foram submetidas à histopatologia e extração de DNA. Merontes de H. canis foram observados nos quatro cães. A infecção por H. canis foi confirmada por PCR e sequenciamento de um fragmento do gene 18S rRNA. A infecção por Leishmania e tipagem foram realizadas por PCR-RFLP do região intergênica ITS1. A carga parasitária foi calculada pela qPCR quantitativa baseada no gene ssrRNA. O teste DPP - Dual Path platform foi realizado. Apenas o Cão #2 era assintomático. Os cães #1 e #4 estavam infectados com L. infantum e foram positivos no DPP. Os cães #2 e #3 estavam infectados com L. braziliensis e foram negativos no DPP. Além disso, visceralização foi observada nos cães #2 e #3, nos quais L. braziliensis foi detectada em amostras de baço e fígado. A visceralização da L. braziliensis associada a sinais clínicos sistêmicos sugerem que esta coinfecção pode ter influenciado na carga parasitária e progressão da doença.

Hematological disorders detected in dogs infected by Hepatozoon canis in a municipality in Mato Grosso do Sul State, Brazil / Alterações hematológicas detectadas em cães infectados por Hepatozoon canis em um município do estado do Mato Grosso do Sul, Brasil

A retrospective review of hematological reports of nine dogs detected with Hepatozoon canis infection by microscopic examination of blood smears in a laboratory in the municipality of Dourados, Mato Grosso do Sul, Brazil was conducted. This study aimed to evaluate the hematological profile of these infected dogs, in addition to the occurrence of coinfections with other agents that infect blood cells, since studies concerning canine hepatozoonosis in Brazil are scarce and there are some divergences regarding H. canis infection that still require a resolution. The nine cases of H. canis infection were identified among all dogs examined at the studied laboratory in 2009 and 2010, with an occurrence of 7/1,192 (0.59%; 95% CI 0.15 - 1.02%) positive dogs in the first year and 2/1,313 (0.15%; 95% CI 0.02 - 0.55%) cases in 2010. The analysis of the hematological reports showed an occurrence of coinfection between H. canis and other agents in two (2/9; 22.22%; 95% CI 2.81 - 60.00%) dogs, one with E. canis and another with Babesia spp. (1/9; 11.11%; 95% CI 0.28 - 48.24%). Only the blood test of one dog had no alterations, based on reference values. Anemia was the most frequent hematological alteration (6/9; 66.67%; 95% CI 29.93 - 92.51%). Although the occurrence of H. canis infection was low, significative hematological alterations were observed in most infected dogs. Coinfection with Babesia spp. and E. canis was detected in two dogs and the hematological alterations cannot be attributed exclusively to H. canis in these animals. Longitudinal studies would be of fundamental importance to determine the causality of these alterations. These results highlight the importance of differential diagnosis in dogs when there is clinical suspicion of infection by hemoparasites, since the hematological changes in dogs infected by H. canis are quite variable.(AU)

Realizou-se estudo retrospectivo de laudos hematológicos de nove cães detectados com infecção por Hepatozoon canis, por meio de exame microscópico de esfregaços sanguíneos, em um laboratório no município de Dourados, Mato Grosso do Sul, Brasil. Este estudo objetivou avaliar o perfil hematológico dos cães infectados, além da ocorrência de coinfecções com outros agentes que infectam células sanguíneas, tendo em vista que estudos a respeito da hepatozoonose canina no Brasil são escassos e que existem algumas divergências a respeito da infecção por H. canis que ainda requerem esclarecimento. Os nove casos de infecção por H. canis foram identificados dentre todos os cães examinados no laboratório estudado, em 2009 e 2010, com uma ocorrência de 7/1.192 (0,59%; IC 95% 0,15 - 1,02%) cães positivos no primeiro ano e de 2/1.313 (0,15%; IC 95% 0,02 - 0,55%) em 2010. A análise dos laudos hematológicos dos nove cães evidenciou a ocorrência de coinfecção entre H. canis e outros agentes em dois (2/9; 22,22%; IC 95% 2,81 - 60,00%) desses cães, um deles com E. canis e outro com Babesia spp. (1/9; 11,11%; IC 95% 0,28 - 48,24%). Apenas o exame sanguíneo de um cão não evidenciou alterações, com base nos valores de referência. Anemia foi a alteração hematológica mais frequentemente observada (6/9; 66,67%; IC 95% 29,93 - 92,51%). Embora a ocorrência de infecções por H. canis neste estudo tenha sido baixa, alterações hematológicas significativas foram observadas na maioria dos cães infectados. Coinfecções com Babesia spp. e E. canis foram observadas em dois cães, não sendo possível atribuir exclusivamente a H. canis as alterações hematológicas detectadas nesses animais. Estudos longitudinais seriam fundamentais para determinar a causalidade dessas alterações. Os resultados ressaltam a importância de realizar diagnóstico diferencial em cães quando há suspeita clínica de infecção por hemoparasitas, uma vez que as alterações hematológicas em cães infectados por H. canis são bastante variáveis.(AU)

Molecular identification of Hepatozoon canis in dogs from Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brazil / Identificação molecular de Hepatozoon canis em cães de Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil

The aim of this study was to investigate the occurrence of Hepatozoon species infecting dogs in the municipality of Campo Grande, Mato Grosso do Sul (MS), Brazil, using blood samples (n = 165) drawn from dogs. The species Hepatozoon caniswas identified in 3.63% of the tested animals using molecular tools. Further studies are needed to determine the clinical relevance of this infection and the main arthropod vectors involved in its transmission.

O objetivo deste estudo foi identificar a frequência e espécies de Hepatozoon infectando cães no município de Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil. Uma amostragem de 165 animais foi utilizada e, por meio do uso de ferramentas moleculares, a espécie Hepatozoon canis foi identificada em 3,63% dos animais. Mais estudos são necessários para identificar a relevância clínica e os principais vetores envolvidos na transmissão desse protozoário na região.

Study on coinfecting vector-borne pathogens in dogs and ticks in Rio Grande do Norte, Brazil / Estudo da coinfecção por patógenos transmitidos por vetores em cães e carrapatos no Rio Grande do Norte, Brasil

Since dogs presenting several vector borne diseases can show none or nonspecific clinical signs depending on the phase of infection, the assessment of the particular agents involved is mandatory. The present study aimed to investigate the presence of Babesia spp., Ehrlichia spp., Anaplasma spp., Hepatozoon spp. and Leishmania spp. in blood samples and ticks, collected from two dogs from Rio Grande do Norte showing suggestive tick-borne disease by using molecular techniques. DNA of E. canis, H. canis and L. infantum were detected in blood samples and R. sanguineus ticks collected from dogs. Among all samples analyzed, two showed the presence of multiple infections with E. canis, H. canis and L. infantum chagasi. Here we highlighted the need for molecular differential diagnosis in dogs showing nonspecific clinical signs.

Cães que apresentam diversas doenças transmitidas por vetores podem mostrar nenhum ou alguns sinais clínicos inespecíficos. Dependendo da fase da infecção, a confirmação dos agentes envolvidos é necessária. O presente estudo teve como objetivo detectar a presença de Babesia spp., Ehrlichia spp., Anaplasma spp., Hepatozoon spp. e Leishmania spp. em amostras de sangue e carrapatos, coletados em dois cães do Rio Grande do Norte. Esses animais apresentavam sinais clínicos sugestivos de doenças transmitidas por carrapatos, quando foram usadas técnicas moleculares. DNA de E. canis, H. canis e L. infantum foram detectados em amostras de sangue e carrapatos R. sanguineus coletados dos cães. Entre todas as amostras analisadas, duas mostraram a presença de infecções múltiplas por E. canis, H. canis e L. infantum chagasi. Destaca-se a necessidade de um diagnóstico molecular diferencial em cães com sinais clínicos inespecíficos.

Retrospective study of clinical and hematological aspects associated with dogs naturally infected by Hepatozoon canis in Ludhiana, Punjab, India

To evaluate clinical and hematological aspects of dogs naturally infected withHepatozoon canis (H. canis) presented at the Small Animal Clinics of Guru Angad Dev Veterinary and Animal Sciences University, Ludhiana. Methods: Blood films of 34 naturally infected dogs were examined for haematological alterations and parasitaemia. Signalment and clinical signs were recorded from the animals. Clinical histories were filled out during the consultation. Results: Of the 34 positive dogs by Giemsa stained peripheral blood films, 88.23% presented parasitaemia by H. canis only, while 11.77% had the combination ofH. canis, Babesia sp. and Ehrlichia sp. Young male dogs less than one-year-old, of non-descript breed, were the most commonly affected. And 26.47% were presented with anorexia/inappetence as the only clinical symptom. Other clinical symptoms were mild to moderate fever, pale mucosae and lethargy; a few were also showing the signs of vomiting and diarrhoea. Haematological alterations showed mainly normochromic-normocytic anaemia, leukocytosis and neutrophilia. Conclusions: The findings of this study substantiate that H. canis caused clinical and haematological alterations of the varied intensity in dogs, even with low parasitaemia, should be taken into consideration.

Brazilian canine hepatozoonosis / Hepatozoonose canina brasileira

The genus Hepatozoon includes hundreds of species that infect birds, reptiles, amphibians and mammals, in all continents with tropical and subtropical climates. Two species have been described in domestic dogs: H. canis, reported in Europe, Asia, Africa, South America and the United States; and H. americanum, which so far has only been diagnosed in the United States. In Brazil, the only species found infecting dogs is H. canis. The objective of this review was to detail some aspects of canine hepatozoonosis, caused by H. canis, and the main points of its biology, transmission, pathogenicity, symptoms, epidemiology and diagnostic methods, with emphasis on research developed in Brazil.

O gênero Hepatozoon compreende centenas de espécies que infectam aves, répteis, anfíbios e mamíferos, em todos os continentes de clima tropical e subtropical. No cão doméstico duas espécies são descritas, H. canis e H. americanum; a primeira presente na Europa, Ásia, África, América do Sul e nos Estados Unidos da América do Norte (EUA), e a segunda, diagnosticada até o momento somente nos EUA. No Brasil, a espécie que infecta o cão foi caracterizada como H. canis. Esta revisão objetiva detalhar alguns aspectos da hepatozoose canina, causada pelo H. canis e principais pontos de biologia, transmissão, patogenia e sintomas, epidemiologia e métodos de diagnóstico, enfatizando as pesquisas desenvolvidas no Brasil.

Molecular detection of Hepatozoon canis and Babesia canis vogeli in domestic dogs from Cuiabá, Brazil / Detecção molecular de Hepatozoon canis e Babesia canis vogeli em cães domésticos de Cuiabá, Brasil

The objective of this study was to report for the first time infection by Hepatozoon spp. and Babesia spp. in 10 dogs from the city of Cuiabá, State of Mato Grosso, central-western Brazil. A pair of primers that amplifies a 574 bp fragment of the 18S rRNA of Hepatozoon spp., and a pair of primers that amplifies a 551 bp fragment of the gene 18S rRNA for Babesia spp. were used. Six dogs were positive for Babesia spp., and 9 were positive for Hepatozoon spp. Co-infection of Babesia spp. and Hepatozoon spp. was seen in 5 dogs. Sequenced samples revealed 100 percent identity with B. canis vogeli, and H. canis. This is the first molecular detection of H. canis in domestic dogs from Cuiabá. Additionally, it is described for the first time the presence of B. canis vogeli circulating among dogs in Cuiabá.

O objetivo deste estudo foi relatar pela primeira vez a infecção por Hepatozoon spp. e Babesia spp. em cães domésticos provenientes da cidade de Cuiabá, estado de Mato Grosso. Foram utilizados pares de primers que amplificam um fragmento de 574 pb do gene 18S rRNA de Hepatozoon spp., e 551 pb do gene 18S rRNA para Babesia spp. Dos 10 cães amostrados, 6 apresentaram-se positivos para Babesia spp., e 9 foram positivos para Hepatozoon spp. pela PCR. Co-infecção entre Babesia spp. e Hepatozoon spp. ocorreu em 5 cães. As amostras revelaram 100 por cento de identidade com B. canis vogeli, e as amostras que foram positivas para Hepatozoon spp. foram 100 por cento idênticas a H. canis. Esta é a primeira identificação molecular de H. canis em cães domésticos em Cuiabá. Adicionalmente, descrevemos pela primeira vez a presença de B. canis vogeli circulando entre cães em Cuiabá.

Uveitis and glaucoma associated with Hepatozoon canis infection: a case report / Uveítis y glaucoma asociados a infección por Hepatozoon canis: reporte de un caso / Uveitis e glaucoma em um canino compatível com infecção por Hepatozoon canis: Reporte de um caso

We report the case of a five years old German Shepherd dog, who presented anterior uveitis in his left eye which then led him to glaucoma and corneal ulcer. Clinical examination found a patient with low body condition, muscle weakness, dull and brittle coat, and unspecific symptomatology. During both the cell blood count (CBC) and blood smears, gamonts of Hepatozoon canis were found in blood and aqueous humor. Diagnosis, treatment and progress are reported.

Se expone el caso de un perro Pastor Alemán de cinco años y medio de edad, el cual presentó uveítis anterior en ojo izquierdo que luego le condujo a glaucoma y úlcera corneal. En el examen clínico se encontró un paciente con baja condición corporal, debilidad muscular, además de un pelaje opaco y quebradizo, con sintomatología inespecífica. Tanto en el hemograma como en los extendidos sanguíneos se encontraron gamontes de Hepatozoon canis en sangre y humor acuoso. Se discute su diagnóstico, tratamiento y evolución.

Expõe-se um caso de um cão Pastor Alemão de cinco anos de idade, o qual apresentou uveitis anterior no olho esquerdo e que levou à presencia de um glaucoma e uma úlcera de córnea. No exame clínico encontrou-se um paciente com baixa condição corporal, debilidade muscular e pelagem opaca e quebradiça, com sintomatologia inespecífica. No hemograma e nos estendidos sanguíneos encontraramse gamontes de Hepatozoon canis no sangue e humor aquoso. Discute-se o seu diagnóstico, tratamento e evolução.

Infecção por Hepatozoon canis em canino doméstico na região Sul do Brasil confirmada por técnicas moleculares / Hepatozoon canis infection in a domestic dog in Southern Brazil confirmed by molecular techniques

Hepatozoonose canina é uma doença transmitida por carrapatos e causada pelo protozoário Hepatozoon spp. No Brasil, existem poucos relatos da infecção e dados sobre sua epidemiologia, patogenicidade, seus vetores e sua caracterização genética. No presente estudo, são utilizadas técnicas moleculares para o diagnóstico e a caracterização do parasita. Foi estudado um canino que apresentava emagrecimento progressivo, anemia regenerativa, neutropenia e hiperglobulinemia. Gamontes de Hepatozoon spp. foram visualizados no esfregaço sanguíneo. DNA foi extraído do sangue, e o diagnóstico foi confirmado pela técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR). O produto da PCR foi purificado a partir do gel e clonado, e o fragmento de 625pb foi sequenciado. A sequência foi submetida ao GenBank como isolado de Porto Alegre, e a análise molecular revelou homologia de 98-100 por cento com Hepatozoon canis e máxima de 92 por cento com Hepatozoon americanum. Este estudo representa a primeira confirmação molecular da presença de H. canis no sul do Brasil.

Canine Hepatozoonosis is a vector-borne disease caused by the protozoa Hepatozoon spp. There are few case reports in Brazil and the epidemiology, pathogenicity, vectors and molecular characterization is poorly understood. The present study used a canine presenting weight loss, regenerative anemia, neutropenia and hyperglobulinemia. Hepatozoon spp. gamonts were observed in the blood smear by microscopy. DNA was extracted from blood, and the diagnosis was confirmed by PCR assay. The PCR product was purified from gel and cloned. A fragment of 625bp was sequenced and submitted to the GenBank database as Isolate Porto Alegre. Molecular analysis showed a homology of 98-100 percent with Hepatozoon canis and less than 92 percent for H. americanum. This study represents the first molecular confirmation that H. canis is present in Southern Brazil.

Uveítis y glaucoma asociados a infección por Hepatozoon canis: reporte de un caso / Uveitis e glaucoma em um canino compatível com infecção por Hepatozoon canis: reporte de um caso / Uveitis and glaucoma associated to Hepatozoon canis infection: a case report

Se expone el caso de un perro Pastor Alemán de cinco años y medio de edad, el cual presentó uveítisanterior en ojo izquierdo que luego le condujo a glaucoma y úlcera corneal. En el examen clínico seencontró un paciente con baja condición corporal, debilidad muscular, además de un pelaje opaco yquebradizo, con sintomatología inespecífica. Tanto en el hemograma como en los extendidos sanguíneosse encontraron gamontes de Hepatozoon canis en sangre y humor acuoso. Se discute su diagnóstico,tratamiento y evolución.

This paper is about the clinical case of a five in a half years old German Sheeper, which presented anterioruveitis in his left eye that later became into galucoma and corneal ulcers. The clinic exam performed to thedog showed a patient with low corporal condition, muscular weekeness, accompanied by dull and fragile hair which are associated symptoms of hepatozoonosis. In the studies performed to the dog It was found gamontsof Hepatozoon canis in blood and aqueous humor. Diagnosis, treatment and progress are reported.

Expõe-se um caso de um cão Pastor Alemão de cinco anos de idade, o qual apresentou uveitis anteriorno olho esquerdo e que levou à presencia de um glaucoma e uma úlcera de córnea. No exame clínicoencontrou-se um paciente com baixa condição corporal, debilidade muscular e pelagem opaca e quebradiça,com sintomatologia inespecífica. No hemograma e nos estendidos sanguíneos encontraram-se gamontes deHepatozoon canis no sangue e humor aquoso. Discute-se o seu diagnóstico, tratamento e evolução.